Microscopia

Microscopia 

El uso de la microscopia en la microbología es de gran importancia. Las bacterias tienen una medida de 0.5 hasta 10 µm por lo que no pueden visualizarse a simple vista, se requiere la ayuda de una herramienta. Esta herramienta es el microscopio, hay diferentes tipos de microscopio los cuales se mencionaran a continuación.

• Microscopio óptico

El microscopio óptico permite aumentar las imágenes de las células hasta 1.000 veces y resolver detalles de tan sólo 0.2 m . Se requiere tres elementos para visualizar células en un microscopio óptico. Primero se debe enfocar una luz brillante sobre el espécimen mediante las lentes del condensador. Segundo, el espécimen debe de estar cuidadosamente preparado para permitir que la luz lo atraviese. Tercero, se debe alinear un sistema apropiado de lentes (objetivo y ocular)para enfocar una imagen del espécimen en el ojo. 

• Microscopio de fluorescencia

Los colorantes fluorescentes utilizados para teñir las células se detectan con la ayuda de un microscopio de fluorescencia. Éste es similar a un microscopio óptico, excepto que la luz atraviesa dos sistemas de filtros. El primero filtra la luz antes de que alcance el espécimen y sólo deja pasar las longitudes de onda que excitan al colorante fluorescente usado. El segundo bloquea esta luz y sólo deja pasar las longitudes de onda emitidas por el colorante fluorescente. Los objetos teñidos se ven de color brillante sobre un fondo oscuro.

• Microscopio confocal

El microscopio confocal es un tipo especializado de microscopio de fluorescencia que construye una imagen por barrido del espécimen con un haz láser. El haz se enfoca en un solo punto a una profundidad determinada del espécimen, y un orificio en el detector permite que sólo la fluorescencia emitida desde este mismo punto sea incluida en la imagen. El barrido del haz por el espécimen genera una imagen definida del plano del foco: un corte óptico. Una serie de cortes ópticos a diferentes profundidades permite construir una imagen tridimensional. Aquí se muestra el embrión de un insecto teñido con una sonda fluorescente para actina (una proteína filamentosa). La microscopia de fluorescencia convencional genera una imagen borrosa, debido a la presencia de estructuras fluorescentes por encima y por debajo del plano del foco.  La microscopia confocal proporciona un corte óptico que muestra con claridad las células individuales

• Microscopio electrónico de transmisión 

El microscopio electrónico de transmisión (MET) es, en principio, similar a un microscopio óptico, pero emplea un haz de electrones en lugar de un haz de luz, y bobinas magnéticas para enfocar el haz en lugar de lentes de cristal. El espécimen, que se coloca en el vacío, debe ser muy delgado. Por lo general, el contraste se introduce tiñendo el espécimen con metales pesados electrodensos que absorben o dispersan localmente electrones y los eliminan del haz cuando éste atraviesa la muestra. El MET tiene un aumento útil de hasta un millón de veces y, en muestras biológicas, puede resolver detalles de tan solo alrededor de 2 nm.

• Microscopio electrónico de barrido 

En el microscopio electrónico de barrido (MEB), el espécimen, que ha sido cubierto con una película muy delgada de un metal pesado, es barrido por un haz de electrones dirigido a un foco por bobinas electromagnéticas que, en estos microscopios, actúan como lentes. La cantidad de electrones dispersados o emitidos mientras el haz bombardea cada punto sucesivo de la superficie del espécimen se mide mediante el detector, y se la usa para controlar la intensidad de los puntos sucesivos en una imagen reconstruida en una pantalla de video. El microscopio genera imágenes llamativas de objetos tridimensionales con gran profundidad de foco y puede resolver detalles en un rango de 2 a 20 nm, lo que depende del aparato.

Referencias

Alberts B., Bray D., Hopkin K., Johnson A., Lewis J., Raff M., Roberts K. & Walter P. (2016). Introducción a la biología celular. D.F., México: Editorial médica panamericana